Bradford-Test

Der Bradford-Test ist eine photometrische Methode zur quantitativen Bestimmung von Proteinen bis zu Konzentration im Bereich Mikrogramm pro Milliliter.[1] Er ist nach dem amerikanischen Biochemiker Marion M. Bradford benannt.

Inhaltsverzeichnis

Prinzip

Der Triphenylmethanfarbstoff Coomassie-Brillant-Blau G-250 (CBBG) bildet in saurer Lösung mit kationischen und unpolaren Seitenketten von Proteinen Komplexe. Die ungebundene (kationische), rote Form des Farbstoffs hat im Absorptionsspektrum ein Maximum bei 470 nm. Durch die Komplexbildung mit Proteinen wird der Farbstoff in seiner blauen, unprotonierten, anionischen Sulfonatform stabilisiert und das Absorptionsmaximum verschiebt sich auf 595 nm.[2] Da der Extinktionskoeffizient des Farbstoff-Protein-Komplexes außerdem sehr viel höher als der des freien Farbstoffes ist, kann die Zunahme der Absorption bei 595 nm durch die Bildung des Komplexes mit hoher Empfindlichkeit gegen das freie Farbreagens photometrisch gemessen werden und ist ein Maß für die Proteinkonzentration der Lösung.

Das Maß der Farbreaktion ist vom Protein abhängig; deshalb wird zur Konzentrationsbestimmung eines bestimmten Proteins eine Kalibrierung notwendig. Steht diese nicht zur Verfügung oder soll die Konzentration eines Proteingemischs bestimmt werden, werden Standardproteine zur Kalibrierung genutzt (z.B. Chymotrypsin, Lysozym oder BSA). Dabei können je nach Zusammensetzung des Proteingemisches für gleiche Proteinmengen unterschiedliche Ergebnisse erhalten werden. Somit ist die Bradfordbestimmung hier ungenau. Ihre Vorteile sind ihre hohe Sensitivität und die einfache und schnelle Durchführung.

Bestimmungsgrenze

Die Bestimmungsgrenze des Mikrotests beträgt 1-20 µg/ml, des Makrotests 20-200 µg/ml Protein.

Störende Substanzen

Salze in physiologischen Konzentrationen und Saccharose haben keinen Einfluss auf das Ergebnis. Hingegen stören Detergenzien wie z.B. SDS, Denaturierungsmittel wie Harnstoff, Guanidiniumchlorid oder Thioharnstoff, und Reduktionsmittel wie DTT (Dithiothreitol). Diese Störanfälligkeit ist ein weiterer Nachteil des Bradford-Tests, da diese Substanzen in der Proteinchemie routinemäßig eingesetzt werden. Können sie nicht aus den Proteinproben eliminiert werden, ist es möglich, die Kalibrierung des Tests und die Proteinbestimmungen - innerhalb gewisser Grenzen - in Gegenwart einer festen Konzentration der störenden Substanz durchzuführen. Dabei verliert man allerdings an Sensitivität.

Vorteile

  • Schnell und preiswert
  • Sehr sensitiv
  • Farbstoff-Protein-Komplex ist für knapp eine Stunde stabil

Nachteile

  • Kalibrierung nötig
  • Störanfällig gegenüber proteinchemischen Reagenzien
  • Nicht-lineare Standardkurve über einen großen Bereich
  • Die Empfindlichkeit für verschiedene Proteine kann weit streuen, womit die Wahl des Standards wichtig wird. Die Methode ist für eine genaue Quantifizierung nur eingeschränkt brauchbar.

Literatur

  1. Bradford, M.M. (1976): A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. In: Anal. Biochem. Bd. 72, S. 248-254. PMID 942051 doi:10.1016/0003-2697(76)90527-3
  2. Compton, S. J., Jones, C. G.: Mechanism of dye response and interference in the Bradford protein assay. In: Anal. Biochem. Bd. 151 (1985), S. 369–374. PMID 4096375 doi:10.1016/0003-2697(85)90190-3

Siehe auch

Weblinks


Wikimedia Foundation.

Schlagen Sie auch in anderen Wörterbüchern nach:

  • Bradford (Begriffsklärung) — Bradford ist der Name folgender Orte: in Großbritannien und Nordirland: Bradford, West Yorkshire oder siehe City of Bradford Bradford (Devon) Bradford on Avon, Wiltshire in Kanada: Bradford (Ontario) in den Vereinigten Staaten: Bradford… …   Deutsch Wikipedia

  • Bradford Cricket League — The Bradford Cricket League (Currently The JCT600 Bradford Cricket League) is one of many cricket leagues in Yorkshire.Yorkshire is one of the most populated parts of the country in terms of cricket leagues with the Bradford League being… …   Wikipedia

  • Proteinbestimmung nach Bradford — Der Bradford Test ist eine sehr empfindliche photometrische Methode zur quantitativen Bestimmung von Proteinen bis zu Konzentration im Bereich Mikrogramm pro Milliliter.[1] Inhaltsverzeichnis 1 Prinzip 2 Bestimmungsgrenze 3 Störende Substanzen …   Deutsch Wikipedia

  • Lowry-Test — Die Proteinbestimmung nach Lowry ist eine Methode, um Proteine quantitativ zu bestimmen.[1] Sie beruht auf zwei Reaktionen: Der erste Schritt beruht auf der Biuretreaktion, nämlich auf der Bildung eines blau violetten, quadratisch planaren… …   Deutsch Wikipedia

  • Biuret-Test — Die Biuretreaktion, auch der Biuret Assay oder der Biuret Test, ist eine chemische Nachweisreaktion für Biuret und für Eiweiße (Proteine), genauer für deren Peptidbindungen. Inhaltsverzeichnis 1 Nachweisprinzip 2 Weitere Nachweisreaktionen für… …   Deutsch Wikipedia

  • University of Bradford School of Management — Bradford University School of Management, located in Bradford, West Yorkshire, England and established in 1963, is an international business school. It occupies buildings near Lister Park which are separate from the main university campus.… …   Wikipedia

  • David Bradford (lawyer) — David Bradford (1762 1808) was a successful lawyer and deputy attorney general for Washington County, Pennsylvania in the late 18th century. He was infamous for his association with the Whiskey Rebellion, and his fictionalized escape to the… …   Wikipedia

  • Aeroport de Leeds-Bradford — Aéroport de Leeds Bradford Aéroport de Leeds Bradford Code AITA LBA Code OACI EGNM Pays …   Wikipédia en Français

  • Aéroport De Leeds-Bradford — Code AITA LBA Code OACI EGNM Pays …   Wikipédia en Français

  • Aéroport de Leeds-Bradford — Code AITA LBA Code OACI EGNM Pays …   Wikipédia en Français

Share the article and excerpts

Direct link
Do a right-click on the link above
and select “Copy Link”